育才学习网1.制备色谱如何用
yun0145（站内联系TA）那位高手帮帮忙！！！whate0545（站内联系TA）制备薄层色谱使用薄层色谱板进行制备分离，从混合物中提取所需要的单体。与常用的柱色谱相比，具有简单、快速与节省溶剂与人力的优点，是实验室比较常用的制备方法之一，比较常用的是制备薄层板色谱、制备离心薄层色谱、制备干柱薄层色谱三个类别。
1、制备薄层板色谱
制备板：一般使用200X200mm的薄层色谱板，吸附剂厚度最好为0.5~1mm，一般不超过2m，平均1mm厚需要的硅胶量为15~20g。为了得到低成本、铺层均匀的高质量制备薄层板，建议使用上海科哲公司的TD-II型全自动制备薄层铺板机。
点样：制备薄层分离的样品量大，一般采用条带点样、不使用圆点点样；一般1mm厚的硅胶最大约100mg，样品浓度不宜太稀，应在2~10%为宜。为了得到均匀而规则的点样结果，建议使用上海科哲公司的SP-3型电动薄层条带点样器。同时展开剂的用量比较大，点样位置要比较高
展开：薄层色谱层析缸要充分饱和，如制备板数量较多，请选用上海科哲公司的制备薄层板架；
显色：一般使用紫外灯或碘蒸汽等非破坏方式显色，或在板边缘进行化学试剂显色；
回收：将检测到的样品连同硅胶一齐刮下，防入砂芯漏斗，使用适当溶剂将组分洗脱，将洗脱溶剂蒸干即可。一般希望洗脱溶剂沸点较低，不与组分发生反应。
制备薄层板色谱优点是使用最为方便、便宜、节省人力，缺点是分离时间较长。
2、制备离心薄层色谱
与普通制备板有三个不同点：
首先：色谱板是圆的，是径向色谱，分离能力优于方板；
其次：洗脱液的流动不靠毛细现象，靠离心力，减少了分离时间与脱尾，分离效能很高；
最后：洗脱液是连续流动的，可以非常容易的形成梯度，并且不需要刮下吸附层，这样可以使色谱板可以反复使用；
所以，制备离心薄层色谱的分离效能与分离速度要远高于制备薄层板色谱，建议采用上海公司科哲公司的KH-CTLC型制备离心薄层色谱仪。
3、制备干柱薄层色谱
可以看作棒状的薄层色谱，优点是简单易行，快速经济、制备量大。缺点是必须使用可透紫外的管材，而且在收集样品时要割断管材，使费用略高。上海科哲公司提供专用的薄层色谱柱。本方法与真空系统联用，构成减压真空色谱，性能会得到进一步提升。
这三种不同的方法在不同场合都拥有自己的优势，总的来讲，制备薄层板色谱适用于制备量较小、分离程度较好的场合；制备离心薄层色谱适用于制备量中等，分离程度较差的场合；制备干柱薄层色谱用于大量样品制备的场合。三种设备如果互相联用，分离效率会进一步提高。这三种设备也可与柱色谱联用yun0145（站内联系TA）非常感谢，很有用。wszyq1985（站内联系TA）样品量大的话，可以用硅胶住层析；如果样两很少，则制备色谱user53900（站内联系TA）：）制备薄层色谱，说起来是相当的简单，呵呵我说说我自己的经验
我上个项目就是提纯分离，考虑到这个制备薄层，结果就用了，但是薄层的最大的缺点就是重复性太小了。我上一批能用薄层制备出来，但是，下次作的制备薄层分离的就不好，因为它的影响因素太多了，比如说温度和湿度，人为的配比，都有一定的误差，说的最直接的就是这一批下来的板子，这快分离所得到的结果，但是下一块就不行，我有过这也的经历。呵呵，日本那边用这个方法的多，但是要有心理准备
2.色谱仪怎么使用
1打开稳压电源；
2打开氮气阀，打开净化器上的载气开关阀，然后检查是否漏气，保证气密性良好；
3调节总流量为适当值（根据刻度的流量表测得）；
4调节分流阀使分流流量为实验所需的流量（用皂膜流量计在气路系统面板上实际测量），柱流量即为总流量减去分流量；
5打开空气、氢气开关阀，调节空气、氢气流量为适当值；
6根据实验需要设置柱温、进样口温度和FID检测器温度；
7打开计算机与工作站；
8FID检测器温度达到150oC以上，按FIRE键点燃FID检测器火焰；
9设置FID检测器灵敏度和输出信号衰减；
10待所设参数达到设置时，即可进样分析；
11实验完毕后，先关闭氢气与空气，用氮气将色谱柱吹净后关机。
注意事项
（必须经严格的培训和考核合格后方可使用该仪器，未经允许不得使用）
1氢气发生器液位不得过高或过低；
2空气源每次使用后必须进行放水操作；
3进样操作要迅速，每次操作要保持一致；
4使用完毕后须在记录本上记录使用情况。——汉高机械
3.高效液相色谱使用步骤
高效液相色谱仪操作步骤如下：
1）. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.
2）. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3）. 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）. 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
6）. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
7）. 设计走样方法。
8）. 进样和进样后操作。
9）. 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）. 填写登记本，由负责人签字。
11）. 流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
12）. 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）. 所有过柱子的液体均需严格的过滤。
14）. 压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法有效方便快捷地解决化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中得出想要的数据，成为重要的分离分析技术。
4.如何使用液相色谱
色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。
但其分离的原理仍然是一样的。我们仍然叫它色谱分析。
操作规程
一、液相色谱要放置在平稳牢固的台面上。
二、液相色谱要有可靠的接地。
三、高压气瓶要放置在阴凉、通风处，通过减压阀和机器连接。
四、使用氢火焰时，应先开助燃气，后开氢气，关闭时应先关氢气，后关助燃气。注意检查氢瓶、减压 阀、连接管线是否泄漏，如有泄漏应立即处理。
五、温控设备，压力表应按规定进行检定。
六、仪器工作室，应放置足够数量的消防器材。
5.气相色谱仪的使用步骤
这个网上一搜，一大吧！下面找也找个了，希望有点用处 随着科技的发展，气相色谱仪成为现今主流的检测设备，该文主要介绍了气相色谱仪的相关原理、操作使用流程及其注意事项。
文章可为气相色谱仪的使用人员提供相关的理论指导及实践经验。（重点看黑色字体涵盖内容就好） 气液色谱法于1952年第一次被创立，该方法发展至今已广泛应用于石油冶炼行业、化学化工行业、生物制药工业、环境监测等领域。
而基于该方法生产的气相色谱仪已成为气相色谱分析的主要工具。但其操作、使用具有一定的规程，操作者必须具备良好的操作技能才能在实践中更好地发挥气相色谱仪的功能。
一、气相色谱仪使用方法、程序 气相色谱仪主要由固定相和流动相组成：固定相和流动相各自有不同的吸附和分配作用；通过两相的相对运动，被检测物质随流动相一起运动，这样物质就在两相间进行反复的分配，从而把不同的组织分离开来。气相色谱仪的使用和操作流程一般包括以下几个程序。
1.加热 不同厂家生产的气相色谱仪给定温度的方式是不相同的。温度给定方式一般可分为：微机设数法、旋钮定位法等。
如果采用微机设数法给定温度，温度可以直接被指定和设置。如果是采用旋钮定位法，其使用则有技巧。
采用过温定位法，将温控旋钮调至低于操作温度约30℃处，给气相色谱仪升温。当过温至约为操作温度时，通过观察温度指示灯和加热指示灯，逐渐将温度控制旋钮调至合适位置。
如果采用分步递进定位法，先将温控旋钮朝升温方向转动一个角度，则仪器开始升温，指示灯亮；当温度达到某一温度基本稳定时，再向相同方向转动旋钮，让仪器温度继续上升；反复按此方法进行温度的递进调节，直至达到所需要的工作温度。2.调池平衡 调池平衡也就是所谓的调热导电桥平衡，其目的是使仪器的输出较为合适。
对于具有池平衡、调零功能和记录功能的仪器，需要讲究一定的调节技巧。3.点火 对于氢焰气相色谱仪，开机的时候需要点火。
或者因为某些原因，火熄灭后也需要重新点火。然而，点不着火的情况我们会经常遇到，所以点火也是需要一定技巧的。
通用的点火方法是，先加大氢气的流量，然后再进行点火，之后将仪器缓慢调回到工作状态。4.气体比例的调节 根据有关资料，对于氢焰气相色谱仪其三气的流量比建议为氮气∶氢气∶空气=1∶1∶10。
但由于在实际仪器中，转子流量计一般做不到非常精确的测量，所以，这个标准的气体配比在实际操作中很难达到。实际操作过程中，可以着重考虑检测器灵敏度和分离效果，根据实际情况来调整配比。
5.进样 气相色谱分析中，常用的进样方法是使用注射器或六通阀门进样。影响进样量的因素主要是气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围。
柱效率主要受进样时间长短的影响。若进样时间过长，会造成色谱区域变宽，从而降低柱效率。
因此，对于冲洗法色谱而言，应尽可能的减短进样时间，一般要求不超过1s。二、气相色谱仪的使用步骤：1、打开稳压电源。
2、打开氮气阀，打开净化器上的载气开关阀，然后检查是否漏气，保证气密性良好。3、调节总流量为适当值（根据刻度的流量表测得）。
4、调节分流阀使分流流量为实验所需的流量（用皂膜流量计在气路系统面板上实际测量），柱流量即为总流量减去分流量。5、打开空气、氢气开关阀，调节空气、氢气流量为适当值。
6、根据实验需要设置柱温、进样口温度和FID检测器温度。7、打开计算机与工作站。
8、FID检测器温度达到150oC以上，按FIRE键点燃FID检测器火焰。9、设置FID检测器灵敏度和输出信号衰减。
10、待所设参数达到设置时，即可进样分析。11、实验完毕后，先关闭氢气与空气，用氮气将色谱柱吹净后关机。
三、气相色谱仪使用注意事项 气相色谱仪在使用过程中一般应着重关注以下几个地方。1.对气相色谱仪分析室的要求（1）分析室周围不得有强磁场，易燃及强腐蚀性气体。
（2）室内环境温度应在5~35度范围内，湿度小于等于85%（相对湿度），且室内应保持空气流通。有条件的厂应该安装空调。
（3）基本具备好3000x800x600 （长X宽X高） （mm）的能承受整套仪器，便于操作的工作平台。平台不能紧靠墙，应离墙0.5~1.0米，便于接线及检修用。
（4）为防止电压波动造成检测的干扰应装备单独容量在10KVA左右的动力线路电源。2.配套气源准备及净化 仪器工作时气体一般由供气钢瓶供应，钢瓶的减压阀要经常检漏，对气体纯度要求较高，纯度应该大于99.99%。
对于空气和氢气发生器，需要定期进行放水、更换干燥剂。（1）气源准备，事先准备好需用气体的高压钢瓶（一般大中城市均可购到），装某一种气体的钢瓶只能装这种气体，每个钢瓶的颜色代表一种气体，不能互换。
一般用高纯氮气，高纯氢气，无油空气这三种气体，每种气体应准备两个钢瓶，以调换备用。有的厂使用氮气发生器、氢气发生器和空气压缩机也可，但空压机必须无油。
凡钢瓶气压下降到1~2Mpa时，应更换气瓶。一般厂家使用使用以上气体99.99%即可，如气相色谱仪配备电子捕获检测器应使用钢瓶高纯气源，纯度在99.999%以上。
（2）气源净化为了出去各种气体中可能含有的水分，。
6.如何.凝胶色谱操作
(1) 凝胶色谱柱的装填：装填前，凝 胶用蒸馏水或洗脱液充分溶胀，配成凝 胶悬浮液。
然后在与色谱柱下端连接的 尼龙管打开的情况下，将凝胶悬浮液一 次性缓慢倒入色谱柱内。装填时，要均 匀，不留气泡，如果发现气泡，必须重装。
装填完后，用300 mL 20 mmol/L的磷酸 缓冲液充分洗涤平衡凝胶12小时，使其 装填紧密。 （2） 样品的加入和洗脱：加样前，打 开下端口，使柱内缓冲液缓慢下降到与 凝胶面平齐，关闭出口。
用吸管将透析 样品加到顶端，不要破坏凝胶面，打开下 触出口，使其深入凝胶层后再关闭。小 心地加入20 mm〇l/L的磷酸缓冲液并进 行洗脱，当红色的蛋白质接近色谱柱底 端时，用试管收集。
7.气相色谱仪的使用方法,及使用注意事项
气相色谱使用注意事项 进样应注意问题 手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡（吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，（指10μl注射器，带芯子注射器平感觉）进样速度要快（但不易特快），每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。
安装色谱柱1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。2.填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。
垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片（岛津色谱是垫片密封）。3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。
防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。4. 毛细管色谱柱 安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。
需要说明的如果你用 毛细管色谱柱 采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。氢气和空气的比例对FID检测器的影响 氢气和空气的比例应1:10，当氢气比例过大时FID检测器的灵敏度急剧下降，在使用色谱时别的条件不变的情况下，灵敏度下降要检查一下氢气和空气流速。
氢气和空气有一种气体不足点火时发出“砰”的一声，随后就灭火，一般当你点火电着就灭，再点还着随后又灭是氢气量不足。使用TCD检测器1.氢气做载气时尾气一定要排到室外。
2.氮气做载气桥流不能设大，比用氢气时要小的多。3.没通载气不能给桥流，桥流要在仪器温度稳定后开始做样前在给。
如何判断FID检测器是否点着火 不同的仪器判断方法不同，有基流显示的看基流大小，没有基流显示的用带抛光面的扳手凑近检测器出口，观察其表面有无水汽凝结 。如何判断进样口密封垫是否该换 进样时感觉特别容易，用TCD检测器不进样时记录仪上有规则小峰出现，说明密封垫漏气该更换。
更换密封垫不要拧的太紧，一般更换时都是在常温，温度升高后会更紧，密封垫拧的太紧会造成进样困难，常常会把注射器针头弄弯。如何选择合适的密封垫 密封垫分一般密封垫和耐高温密封垫，汽化室温度超过300℃时用耐高温密封垫，耐高温密封垫的一面有一层膜，使用时带膜的面朝下。
怎样防止进样针不弯 很多做色谱分析工作的新手常常会把注射器的针头和注射器杆弄弯，原因是：1.进样口拧的太紧，室温下拧的太紧当汽化室温度升高时硅胶密封垫膨胀后会更紧，这时注射器很难扎进去。2.位置找不好针扎在进样口金属部位。
3.注射器杆弯是进样时用力太猛，进口色谱带一个进样器架，用进样器架进样就不会把注射器杆弄弯。4.因为注射器内壁有污染，注射时将针杆推弯。
注射器用一段时间就会发现针管内靠近顶部有一小段黑的东西，这时吸样注射感到吃力。清洗方法将针杆拔出，注入一点水，将针杆插到有污染的位置反复推拉，一次不行再注入水直到将污染物弄掉，这时你会看到注射器内的水变的浑浊，将针杆拔出用滤纸擦一下，再用酒精洗几次。
分析的样品为溶剂溶解的固体样时，进完样要及时用溶剂洗注射器。5.进样时一定要稳重，急于求快会把注射器弄弯的，只要你进样熟练了自然就快了。
提高分离度的几种方法1.增加柱长可以增加分离度.2.减少进样量（固体样品加大溶剂量）.3.提高进样技术防止造成两次进样.4.降低载气流速.5.降低色谱柱温度.6.提高汽化室温度.7.减少系统的死体积，主要是色谱柱连接要插到位，不分流进样要选择不分流结构汽化室。8. 毛细管色谱柱 要分流，选择合适的分流比. 综上所诉要根据具体情况在实验中摸索，比如降低载气流速、降低色谱柱温度又会使色谱峰变宽，因此要看色谱峰型来改变条件。
最终目的是达到分离好，出峰时间快。气相色谱 柱的安装 色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。
正确的安装请参考以下步骤：步骤1. 检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。
步骤2. 将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平 步骤3. 将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。
通常来说，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1-2cm，这就是较为理想的状态。（具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册）避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。
将色谱柱正确插入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧后（用手拧不动了）用扳手再多拧1/4-1/2圈，保证安装的密封程度。因为不紧密的安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有可能对色谱柱造成永久损坏。
步骤4. 接通载气当色谱柱与进样口接好后，通载气， 调节柱前压以得到合适的载气流速（见下表）。柱前压设置为Psi 15m 25m 30m 50m 100m 0.20mm 10-15 20-30 18-30 40-60 。
8.液相色谱的使用方法
液相色谱仪使用操作规程总流程：
超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱 ——纯乙睛保存柱
1. 电源准备
打开稳压器电源开关，须待电压指示至 220V 后，才能开启其他有关设备。
2.LC-600高效液相色谱仪的准备
试剂：三氟乙酸
乙腈（Fisher 公司产品色谱纯）
超纯水（Millipore 超纯水）
冰乙酸
溶液配置：贮液瓶与流动相的准备
A 液 0.1%三氟乙酸 （三氟乙酸 1ml，超纯水 999ml）室温保存
B 液 60%乙腈 （乙腈 600ml， 超纯水 400ml）室温保存
样品液 0.01%乙酸 （冰乙酸 10 l 超纯水 100ml）室温保存
泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是 1%色谱纯甲醇 室温保存
注：贮液瓶应用超纯水淌洗干净，备用。
流动相溶剂用洁净 G4 玻沙漏斗精滤除去微小颗粒（目前未滤过溶液）。
操作者必须清楚并注明 A、B 贮液瓶盛装为何种溶剂。
冲 洗 泵 头 ： 用 注 射 管 于 软 塑 料 管 末端 抽 吸 至 有 水 流 出 ， 调 节 流 速 开 关 控 制 流 速 为20-30drop/min.（目前我们很少冲泵头。）
① 流动相管道排气
如果，管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。）
② 开机
③ 进入LC-600高效液相色谱仪操作系统
④ 数据记录的终止与保存
3. 图谱处图
4. 关机
1)N2000色谱工作站的关闭
在 N2000的主操作界面上分别单击关闭泵、检测器图标，或通过菜单关闭。关闭电脑主机及显示器。将所有使用仪器用布盖好。关闭排气扇、空调与稳压器开关。
2） 清洁卫生
实验完毕后，打扫仪器室桌面与地面清洁，保持桌面整洁。
3） 仪器使用记录
记录当天的仪器使用情况于指定记录本上，包括仪器使用起止时间与出现问题的解决方案，并签上操作者的名字.以上为---液相色谱仪的使用方法
9.什么叫色谱,有什么用,原理是什么
色谱分析原理
色谱法是一种分离分析方法。操作时使用色谱仪，被分析样品（气体或液体汽化后的蒸汽）在流速保持一定的惰性气体（成为载气或流动相）的带动下进入填充有固定相的色谱柱，在色谱柱中样品被分离成一个个的单一组分，并以一定的先后次序从色谱柱流出，进入检测器，转变成电信号，再经放大后，由记录器记录下来，在记录纸上得到一组曲线图（称为色谱图），根据色谱峰的峰高或峰面积就可以定量测定样品中各个组分的含量。
色谱的定量检测方法一般有归一化法、内标法和外标三种方法，其各有优缺点。归一化法是将有机样品中所有组分的含量之和定位100%，计算出其中某一组分含量的百分数，其方便简单，样品进样量和流动相载气流速等对计算结果影响不大，但要求每个组分色谱峰面积能准确地计算，因此仅适合组分少的有机样品。内标法是向有机样品中加入标准已知含量的纯有机物（可以和样品中组分相同，也可以不同）进行气相色谱测定，然后利用欲测组分和内标物的色谱峰面积和定量校正因子进行定量分析，其避免了归一化方法的缺点，但需要标准标准称取有机样品和内标物的重量，而且选用的内标物的选取要求较高。
外标法[14]是在进样量、色谱仪器及操作等分析条件严格固定不变的前提下，先使用不同含量的组分纯物质等量进样进行色谱分析，求出纯物质含量和色谱峰面积的关系，并绘出相应的定量校正曲线或给出线性方程式。然后将有机样品在相同条件下进行色谱分析，并根据定量校正曲线或线性方程式，计算出所需组分的定量分析结果。外标法比较简便，尤其适合相同样品的大批量测试，这对工业化生产或环境中某种有机物的检测或控制非常有效。但这一方法对液体或挥发性不好的有机物组分定量分析时，往往误差较大。
