1.PCR反应条件为温度、时间和循环次数;
2.温度与时间的设置,基于PCR原理三步骤而设置变性,退火,延伸三温度点,在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90至95摄氏度变性,再迅速冷却至40至60摄氏度,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70至75摄氏度,在聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸,对于较短靶基因,除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94摄氏度变性,65摄氏度左右退火与延伸,变性温度低,一般情况下93摄氏度足以使模板DNA变性,退火温度是影响PCR特异性的较重要因素,变性后温度快速冷却至40至60摄氏度,可使引物和模板发生结合,退火温度与时间取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,55摄氏度最佳,复性时间30至60秒足以使引物与模板之间完全结合,PCR反应的延伸温度选择在70至75摄氏度之间,72摄氏度最佳等。
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