超氧化物歧化酶SOD的催化底物是氧气,一般多以一定时间内产物生成量或底物的消耗量作为酶活性单位。由于氧气自身很不稳定,且不易制备,测定SOD的方法除少数采用直接法外,一般多为间接法。
1.直接法,原理是根据氧气或产生氧气的物质本身的性质测定氧气的歧化量,从而确定SOD的活性。
经典的直接法包括:脉冲辐射分解法,电子顺磁共振波法EPR,核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵,一般较少应用。
2.一般化学法,这些方法的共同特点是要有一个氧气的产生体系和一个被氧气还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下,一部分氧气被SOD歧化,因而氧气还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度,测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法,细胞色素碳还原法,羟胺法,黄嘌呤氧化酶法,肾上腺素法,六羟多巴胺法,亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。